肉的宰后嫩化主要归因于肌原化学弹性纤维板架构的破裂，肌原化学弹性纤维板架构是由内源性淀粉酶电离酶溶解肌原化学弹性纤维板和肿瘤神经元骨架淀粉酶容易造成的。与几百年来时不时是私信视点的钙淀粉酶酶有差异，胱天淀粉酶酶（caspases）最进是感兴致语录题。胱天淀粉酶酶在肿瘤神经元凋亡的制定价段起着至关关键的用途，在当中caspase-3在死去淀粉酶电离中的用途是相互面和繁多的，往往什么值得进这一步钻研。S-亚硝基化依据调准钙宣泄、能量是什么分解、淀粉酶质溶解和肿瘤神经元凋亡来调准肉肥，以及嫩度和持水特性。后期钻研察觉到S-亚硝基化都可以再降依赖关系的线粒体的caspase-3级联响应，这很有可能是相关肌肉肿瘤神经元凋亡和羊肉品控变迁的理由。caspase-3的钻研省级重点是其与肿瘤神经元凋亡的关系的，然后，极少有钻研探究S-亚硝基化调准caspase-3的缘由。

2024年9月由武汉渔业综合大学张万刚教援技术团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化遮盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

简体中文标题格式：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

刊物：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2025年危害细胞因子：5.7

刊登准确时间：2024年9月

潜在客户机关单位：南京农业大学

的研究原料：蛋白

拜谱能提供方法：亚硝基化修饰组学

的技术风格：

一、研究探讨结果显示

01.Caspase-3活力性

迄今为止尚不清析NO对caspase-3的缓和反应有无归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异酸度梯度方向的GSNO看作外源性NO供货，以诱导型caspase-3的身体外S-亚硝基化。后果发现，与无GSNO的组相较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活力有效较低（图1），与仍然报导保持一致。GSNO解决较低caspase-3活力的潜在的主要原因仍进一步体现了。

图1 不同于浓硫酸浓度的GSNO加工处理对caspase-3化学活化的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化情况

深入分析Caspase-3的亚硝基化度，以体现了GSNO对Caspase-3的反响性。经GSNO操作后，监测到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化抗拉强度增添（图2）。这么多报告单表示，外源性GSNO培养出来可取得胜利分析caspase-3的离体S-亚硝基化。最令 诧异的是，在不会GSNO会出现的较组中监测到的忽闪的S-亚硝基化带，这表示caspase-3将突发内源性的S-亚硝基化。与此同时，本深入分析中caspase-3的S-亚硝基化度较高，而caspase-3的渗透性拉低，这与过后的深入分析不对。而是，caspase-3的特异形S-亚硝基化绘制位点尚不清除，还需用进十步的打磨。

图2 GSNO办理对caspase-3S-亚硝基化水准的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化体现组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。黑色图标图片的编码队列表明S-亚硝基化肽，鲜红色图标图片的C表明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3化学降解结蛋清

结血清酶看做一类更重要的的组织骨架血清酶，在达到肌组织格局的格局完正详细性和收拢性方向起侧更重要的功能，钻研S-亚硝基化caspase-3对结血清酶光吸附的铭物质性享有更重要的意议。与Std（未用胱天血清酶酶-3和GSNO孵育的初使肌化学纤维棉血清酶）组相较于，0 μM GSNO组（肌原化学纤维棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的完正详细结血清酶含氧量显著性减少，显示caspase-3对结血清酶享有暗藏的血清酶淀粉水解学习能力。在GSNO孵育后，完正详细结血清酶的含氧量看不出不断增加（P < 0.05）。不仅，当GSNO氧浓度增加时，完正详细结血清酶的含氧量将持续上浮（P < 0.05）（图5）。该遇到表面，SNO遮盖的caspase-3以品质根据的方案能够抑制结血清酶的光吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3可降解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

肌钙核球核蛋清-T (TnT)是原肌球核球核蛋清调试复杂身体肌肉伸缩的细条的所需肌原化学弹性食物纤维核球核蛋清。TnT的可溶解本质特征是测试到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化前提下，caspase-3对TnT的可溶解条件如下图下图6下图，与Std组（不能caspase-3和GSNO的肌原化学弹性食物纤维）较之，caspase-3组中30 kDa TnT精彩电影片段相关系数性延长，找到caspase-3操作了TnT的可溶解，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育导至30 kDa TnT回落。在100和200 μM GSNO组相互不能测试到看不出的不同(P > 0.05)，而当GSNO的浓度值高于400 μM 时，该精彩电影片段相关系数性下降(P < 0.05)。这一些找到找到了SNO突显的caspase-3对TnT可溶解的促使效用。结核球核蛋清和TnT是caspase-3的铭感底物，而GSNO正确处理下降caspase-3的灵活力也许导至肌原化学弹性食物纤维核球核蛋清可溶解阶段下降。笔者认为所写，NO介导的S-亚硝基化是可以经由突显半胱氨酸残基来调试caspase-3的灵活力，行而拓宽渠道骤关系力其对结核球核蛋清和TnT的核球核蛋清油脂水解本事，关键在于关系力鸡肉口感。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本研究方案关键在于试论S-亚硝基化对caspase-3突显的印象非常马上又对羊肉肌原玻璃合成纤维休外降解塑料的印象。淀粉酶S-亚硝基化可以突显caspase-3的半胱氨酸残基，关键在于导至caspase-3抗逆性减轻，进三步仰制了其对羊肉肌原玻璃合成纤维淀粉酶的淀粉酶水解反应技能。

三、拜谱总结ppt

的深入分析用了酶活检验，亚硝基化体现组学深入分析分析，WB等测量管理机制，挖掘淀粉酶S-亚硝基化能体现caspase-3的半胱氨酸残基，这引起了caspase-3抗逆性的降底，齐头并进一部可以抑制了其对牛肉片肌原棉纤维淀粉酶的淀粉酶水解反应学习能力。本的深入分析为定义淀粉酶质亚硝基化对吃起来的房产调控管理机制给予新一个新的视野。

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对比文章：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663